Pratica de laboratório: Extração do DNA da cebola.

 Recentemente tivemos a aula prática de extração do DNA da cebola, ministrada pela profa. Joelma Nascimento para os alunos do 2º e 3º ano do EMI, usando o mesmo protocolo que se usa para extrair DNA Humano para testes de paternidade por exemplo.

O objetivo desta prática não é a visualização da dupla hélice e sim a extração do material genético do núcleo de células eucariontes.

O experimento consiste em 3 etapas:

     1-    Ruptura (física e química) das membranas celulares para liberação do material genético; no caso da cebola.

 

     2-    O desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas;

      3-    A separação do DNA dos demais componentes celulares.

Basicamente os alunos realizaram a maceração da cebola para ruptura da parede celular, expondo o material genético das células, em um Becker adicionaram ao material macerado a solução de lise composta de: Água destilada; NaCl e detergente, as moléculas do detergente desestruturam as moléculas de lipídios presentes nas membranas celulares; posteriormente fizeram a filtragem para obtenção do concentrado , os alunos pipetaram 5 ml do material em um tubo de ensaio e depois levaram ao aquecimento em banho Maria por 15 minutos,controlando sempre a temperatura ideal para a reação que era de 60º com o auxílio de termômetro, o aquecimento favorece a reação e desnatura as moléculas de DNA, depois o resfriamento do concentrado descansando os tubos de ensaio em água gelada por 5 minutos, posteriormente a  adição de álcool também gelado, o DNA é insolúvel em álcool e deste modo se separa da solução, o DNA tem também menor densidade que os outros constituintes celulares, por isso surge na superfície da solução. O álcool desidrata as moléculas de DNA, fazendo com que elas se aglutinem.

. O resultado foi a visualização de uma massa filamentosa e esbranquiçada que são milhares de fitas de DNA juntas.

A estrutura de dupla-hélice não é identificada, pois só pode ser visualizada através de aparelhos sofisticados.